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배 양
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생체 조직을 생체 밖의 환경에서 어느 일정 기간 생육시키는 기술이다. 생명현상 해명을 위하여 세포, 조직을 독립된 생명체로 인식하고 분자 생물학 등 연구재료로 이용하기 위해 만들었다. 사용구조에 따라 기관배양(organ culture), 조직배양(tissue culture), 세포배양(cell culture)으로 나눌수있고 세포종류에 따라 초대배양(primary culture), 세포주 배양(cell line culture)로 나눌수있다.
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배양의 분류
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초대배양
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정상조직이나 암조직으로 부터 바로 분리된 세포의 배양으로서 여러 세포종이 혼합된다. 원래의 세포기능을 유지한다는것이 장점이고 세포의 균일성, 재현성을 확신할 수 없다는것이 단점이다.
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세포주 배양
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무한 증식을 할 수 있는 세포로 현재는 단일 세포라는 개념이다.
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배양시설
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배양설비
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사용용도
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탄산가스 배양기
(CO2 incubator)
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pH조적은 배지의 중탄산 나트륨과 CO2가스의 평형에 의해 이루어진다.
5% CO2 - 95% air 유지
재킷형 CO2 incubator 주로 사용 - water 재킷(멸균수) : 온도 조절
- 가습 vat : 습도 조절
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배양실과 clean bench
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배양실 : 무균실
clean bench : 무균조작을 위한 무균상자, 자외선 멸균장치 포함
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배양 접시
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culture flask - 배양용량이 큰 배양용기, screw cap부착
petri-dish - 조직배양용 dish(접착세포 배양), 일반세균 배양용dish(부유세포 배양)
multi-well plate - 96 well 사용, 소량의 배양액
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에어컨
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온도조절
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Inverted microscope
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무염색 세포관찰
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가압 증기 멸균기(autoclave)
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멸균장치
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Deep freezer
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동결보존 -80도 유지
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원심분리기
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세포와 배양액의 분리
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냉동냉장고
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배지, 시약 등의 보존
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cover slip
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염색용
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auto pipette
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분주
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혈구 게시판
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세포수 측정
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세포수
계산법
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전세포수 계산
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culter counter
혈구 계산판
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생세포수 계산
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원리 : 색소 배제 능력 tryphan blue염색 - 사세포는 배제 능력이 없고 청색으로 염색한다.
생세포율(%) = (생세포수) / (생세포수 + 사세포수)
생세포수(cell / ml) = 전세포수(cells / ml) X 생존율(%)
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